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2022年生物化学与分子生物学博士考点 (28)

2021-11-17 06:57:03来源：网络

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　　氨基酸顺序分析

　　蛋白质多肽链的氨基酸顺序分析，即蛋白质一级结构的测定，主要有以下几个步骤：

　　1. 分离纯化蛋白质，得到一定量的蛋白质纯品;

　　2. 取一定量的样品进行完全水解，再测定蛋白质的氨基酸组成;

　　3. 分析蛋白质的N-端和C-端氨基酸;

　　4. 采用特异性的酶(如胰凝乳蛋白酶)或化学试剂(如溴化氰)将蛋白质处理为若干条肽段;

　　5. 分离纯化单一肽段;

　　6. 测定各条肽段的氨基酸顺序。一般采用Edman降解法，用异硫氰酸苯酯进行反应，将氨基酸降解后，逐一进行测定;

　　7. 至少用两种不同的方法处理蛋白质，分别得到其肽段的氨基酸顺序;

　　8. 将两套不同肽段的氨基酸顺序进行比较，以获得完整的蛋白质分子的氨基酸顺序。

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